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固相萃取中常見的問題及解決方法

更新時間:2021-11-11 點擊次數(shù):3704

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固相萃取是一種利用固體吸附劑對樣品中不同組分的選擇性吸附能力差異來分離、純化樣品的前處理方法。固相萃取技術(shù)是食品檢測中最chang用到的技術(shù)手段,下面列舉了一些在固相萃取中常見的問題及解決方法。



  

01


· 目標化合物回收率偏低(目標化合物沒有或部分被吸附在SPE柱上)

原因1:SPE柱沒有很好地被預處理

解決方法:反向柱:用甲醇,異丙醇或乙醇處理柱子,然后用稀釋樣品的溶劑處理柱子,注意不能讓SPE柱變干。

原因2:SPE柱的極性不合適

解決方法:選擇對目標化合物有明顯選擇性的SPE柱。

原因3:目標化合物對樣品溶液的親和力遠遠大于對SPE柱的親和力

解決方法:改變極性或樣品溶液的pH使目標化合物在樣品溶液中的親和力降低。

原因4:當大體積水樣品通過SPE柱時,反相柱填料失去柱子預處理留下的甲醇

解決方法:在樣品溶液中加入1%-2%的甲醇或異丙醇或乙腈。



02

· 目標化合物回收率偏低(目標化合物沒有被洗脫出SPE柱)

原因1:SPE柱的極性不合適

解決方法:選擇其他低極性或者選擇性弱的SPE柱。

原因2:洗脫溶劑不夠強,無法將目標物化合物從SPE柱上洗脫

解決方法:改變洗脫溶劑的pH以增加其對目標化合物的親和力。

原因3:洗脫溶劑體積太小

解決方法:增加溶劑體積。

原因4:目標化合物被不可逆地吸附在SPE載體上

解決方法:反相:選擇疏水性弱的載體。如果原來用的C18,則改為C8,C2,CN。

陽離子交換:用羧酸取代苯磺酸。

陰離子交換:用伯胺、仲胺代替叔胺。



03

· 萃取重現(xiàn)性差

原因1:在添加樣品之前SPE柱已干燥

解決方法:重新進行SPE預處理。

原因2:SPE柱超容量

解決方法:減少樣品量或選擇大容量柱。

原因3:樣品過柱流速太快

解決方法:降低流速。

原因4:洗脫液流速太快

解決方法:在使用外力之前讓洗脫液滲透過柱。兩次5ml洗脫可能比一次10ml,更有效。

原因5:目標化合物在樣品中的溶解度太大,樣品過柱時與樣品同時通過柱子而沒有被保留

解決方法:通過改變樣品極性或pH而改變目標化合物的溶解度。

原因6:SPE柱用極性溶劑處理而洗脫劑是不兼容的非極性溶劑

解決方法:在使用非極性溶劑之前對SPE柱進行干燥。

原因7:洗滌雜質(zhì)用的溶劑太強,部分目標化合物與雜質(zhì)同時被從SPE柱洗脫。目標化合物在這一步損失的多少取決于洗滌溶劑的流速,SPE的特性以及洗滌溶劑的體積。

解決方法:降低洗滌溶劑的強度。

原因8:洗脫液體積太小

解決方法:增加洗脫液的體積。



04

· 在用反相SPE柱萃取時,洗脫餾分中有水

原因:目標物化合物洗脫之前SPE柱沒有很好地干燥

解決方法:用氮氣或空氣干燥SPE柱:用20~100μL含60%-90%甲醇-水將SPE柱上的殘留水分除去。



05

· 洗脫餾分中含有干擾物

原因1:干擾物與目標化合物被同時洗脫

解決方法1:在洗脫目標化合物之前選用中等極性的溶劑將干擾物洗滌出SPE柱??蓪煞N或更多種的溶劑混合以達到不同的極性。

解決方法2:選用對目標物化合物親和力更大而對干擾物親和力低的SPE柱。

原因2:干擾物來自SPE柱

解決方法1:用兩根不同極性的SPE柱以除去干擾物。如反相柱和離子交換柱或硅膠柱。

解決方法2:在柱子預處理之前用洗脫溶劑洗滌SPE柱。



06

· SPE柱流速降低或者阻塞

原因1:樣品存在過多的顆粒

解決方法:對樣品進行過濾或者離心。

原因2:樣品溶液粘度太大

解決方法:用溶劑對樣品進行稀釋。



07

·用反相柱從固態(tài)樣品中萃取非極性目標化合物

原因:目標化合物不在液體溶液中

解決方法:用甲醇、異丙醇或乙醇對樣品進行均漿處理。然后離心過濾,再用水將清液稀釋為含水量70%-90%的水溶液。



08

· 用正相柱從固態(tài)樣品中萃取目標化合物

原因:目標化合物不在液體溶液中

解決方法:用非極性溶劑(如正己烷、石油醚、氯仿等)均漿。




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