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實驗技巧 | 揮發(fā)性或粘度高的試劑,流動相配置需注意

更新時間:2023-08-10 點擊次數(shù):1382

流動相是高效液相檢測中非常重要的一個環(huán)節(jié),其操作的合規(guī)性準確性直接影響到實驗結(jié)果的準確性和有效性。在日常檢測中,我們經(jīng)常會遇到流動相含有揮發(fā)性試劑(如三氟yi酸(TFA)、三乙胺、濃氨等)的情況;也會遇到含粘度較高的組分(如磷酸等)。這些組分在流動相配置時,其添加方法需要特別注意,以免因試劑揮發(fā)或放液不wan全而影響實驗結(jié)果。


三乙胺是液相流動相中常用的一種組分,起到調(diào)節(jié)pH,屏蔽固定相上的硅羥基從而修飾峰形,改善峰拖尾等作用。同時它也是一種揮發(fā)性試劑,如按常規(guī)方法,在液面以上放液,就會出現(xiàn)因三乙胺揮發(fā)導(dǎo)致的流動相配置不準確的情況,因此在添加三乙胺等揮發(fā)性試劑時,建議選用量入式移液管,伸至液面以下再放液。

示例


某項目,流動相為:15mmol/L磷酸二氫鉀溶液(含0.06%三乙胺和0.14%磷酸)

流動相配置一:常規(guī)配置方法,三乙胺在液面以上放液,配置流動相。


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通過以上兩圖對比可發(fā)現(xiàn),不同的流動相配置操作,會導(dǎo)致出峰時間的明顯變化。



結(jié)論


配置流動相時,要按不同試劑的特性選擇合適的配制方法,不能一概而論。

1)對于揮發(fā)性試劑,如三乙胺,二乙胺,三氟yi酸,七氟丁酸等,添加時,為避免揮發(fā)導(dǎo)致濃度差異,配置時將移液管插入到液面以下再放液。

2)對于粘稠試劑,如磷酸,量取時要盡量慢,吸取完畢后用紙巾擦拭管口周圍,避免試劑附著在管口,影響添加試劑的濃度。添加時,要注意放緩放液速度,以避免因放液過快,部分試劑還附著在移液管壁沒有流下,導(dǎo)致流動相的濃度差異。


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